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以下這些就是DNA提取試劑盒的實驗原理

點擊次數(shù):4302 更新時間:2022-04-18
  DNA提取試劑盒是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 
  DNA提取試劑盒的實驗目的:
  1、掌握PCR法擴增目的基因片段的基本原理與方法;
  2、通過PCR驗證目的基因片段是否插入質(zhì)粒中;
  3、充分理解本學期三次分子實驗的原理、聯(lián)系與意義。
 

 

  實驗原理:
  分子生物學實驗技術(shù)基本原理:
  PCR即聚合酶鏈式反應,是指在DNA聚合酶催化下,以母鏈DNA為模板,以特定引物為延伸起點,通過變性、退火、延伸等步驟,體外復制出與母鏈模板DNA互補的子鏈DNA的過程。是一項DNA體外合成放大技術(shù),能快速特異地在體外擴增一定長度的DNA片段??捎糜诨蚍蛛x克隆,序列分析,基因表達調(diào)控,基因多態(tài)性研究等許多方面。
  在高溫(94℃)下,待擴增的靶DNA雙鏈受熱變性成為兩條單鏈DNA模板;而后在低溫(37~55℃)情況下,兩條人工合成的寡核苷酸引物與互補的單鏈DNA模板結(jié)合,形成部分雙鏈;在普通Taq酶的最適溫度(72℃)下,以引物3’端為合成的起點,以d NTP為原料,沿模板以5’→3’方向延伸,合成DNA新鏈。這樣,每一雙鏈的DNA模板,經(jīng)過一次解鏈、退火、延伸三個步驟的熱循環(huán)后就成了兩條雙鏈DNA分子。如此反復進行,每一次循環(huán)所產(chǎn)生的DNA均能成為下一次循環(huán)的模板,每一次循環(huán)都使兩條人工合成的引物間的DNA特異區(qū)拷貝數(shù)擴增一倍,PCR產(chǎn)物得以2n的形式迅速擴增,經(jīng)過25~30個循環(huán)后,理論上可使基因擴增10 倍以上。
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